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文献综述与前列腺癌干细胞利用免疫磁珠和胶原黏附法分选出 整合素 表型的具有干细胞

发布时间:2019-12-22 11:40    点击次数:91次   

  文献综述与前列腺癌干细胞利用免疫磁珠和胶原黏附法分选出 整合素 表型的具有干细胞特性、肿瘤源性的前列腺细胞 随后 亦被发现为前列腺癌干细胞表面标记【 因此 整合素 前列腺癌细胞亚群被假定为前列腺癌干细胞。前列腺癌干细胞不表达雄激素受体 从而导致了前列腺癌内分泌治疗的难治性和复发性【 与胰腺癌干细胞“

  文献综述与前列腺癌干细胞利用免疫磁珠和胶原黏附法分选出 整合素 表型的具有干细胞特性、肿瘤源性的前列腺细胞 随后 亦被发现为前列腺癌干细胞表面标记【 因此 整合素 前列腺癌细胞亚群被假定为前列腺癌干细胞。前列腺癌干细胞不表达雄激素受体 从而导致了前列腺癌内分泌治疗的难治性和复发性【 与胰腺癌干细胞“等将非肥胖型糖尿病 重症联合免疫缺 细胞分离出再接种到小鼠皮下 发现其具有很强的肿瘤形成能力 因此而假定 细胞为潜在的胰腺癌干细胞。 与卵巢癌干细胞 】将人卵巢浆液性腺癌组织中来源于组织干细胞的非依赖性球形细胞经自我更新选择性生长培养后种植于、鼠皮下 发现 个球形细胞即可使 小鼠形成原发性卵巢 级浆液性腺癌 和亲代细胞及较高分化的卵巢癌干细胞相比 这些癌细胞对顺铂及紫杉醇耐药性增强 且干细胞表面标记物 干细胞因子 表达水平上调免疫染色显示 表达水平办明显上调。相似的是皮下注射 细胞亦可诱导肿瘤形成而种植非选择性细胞及皮下注射 ’细胞均不能致瘤由此认为 卵巢癌细胞是卵巢癌干细胞。 与头颈部鳞癌干细胞 】用流式细胞仪检测人头颈部鳞癌组织和 永生细胞株中 的表达情况 发现肿瘤组织中 表达水平个体差异很大 而所有 永生细胞株均组成性表达 因此得出结论 肿瘤干细胞可能在 永生细胞株建立上起主导作用 具有极强的促进 进展和转移的潜能。 ‘细胞群再将荧光激活细胞分类纯化的 细胞矛 。细胞以不同剂量分别种植于小鼠体内发现在同一剂量水平下 细胞的致瘤效率明显高于 。细胞。因此认为细胞为头颈部鳞癌干细胞。 与肿瘤干细胞的关系 与脑肿瘤干细胞 性细胞这类细胞具有明显的自我更新、增殖和分化能力 在体外培养时可分化形成 堂垡堡茎肿瘤细胞与从肿瘤患者中分离的肿瘤细胞表型相似。 等在儿童脑肿瘤中的研究结果也表 的表达与肿瘤的恶性程度相关。随后 。细胞再植入 小鼠大脑。结果 细胞能产生克隆形成细胞 具有自我更新和增殖能力 并且能分化成与原发瘤相同的表型 ’不能形成肿瘤。从而证实 细胞的干细胞特性。 】利用免疫组化的方法证实了在多种类型各级别的神经上皮肿瘤组织中均存在一定比例的 阳性细胞 并且在不同级别肿瘤中 阳性细胞差异存在显著性 恶性程度越高的肿瘤中 性细胞比例就越高 二者呈正相关。 在神经系统肿瘤耐药性的研究中发现临床治疗后肿瘤的缩小并不是判断预后的主要因素 原因是残留的约 的肿瘤干细胞 这些细胞的侵袭、转移特征使肿瘤再次增殖、复发 直至导致患者死亡。研究表明 细胞在脑胶质瘤中很丰富 细胞对于化疗和放疗的敏感性比一细胞差 增殖能力更强。毕长龙等【蚓报道 神经上皮肿瘤 胶质瘤细胞具有天然耐药性 提示 细胞是胶质瘤化疗的关键性治疗标靶。 与前列腺癌干细胞 】等研究认为在转移性前列腺癌患者中 有少量的肿瘤细胞是能表达 的肿瘤干细胞。这类细胞相对于其他类型的细胞 有非常强的自我增殖、更新的能力 能分化为克隆性和非克隆性细胞 分化的细胞表达雄激素受体和前列腺酸性磷酸酶。前列腺癌干细胞不表达雄激素受体 从而导致了前列腺癌内分泌治疗的难治性和复发性 等【删从良性和恶性 前列腺细胞系中分选干细胞 细胞有很高的增殖潜能 并能分化为雄激素受体 性细胞。 与乳腺癌干细胞 基因缺陷引起的小鼠乳腺肿瘤细胞系细胞数目增加 这些细胞能够形成细胞球 仅需要 标志细胞就可使鼠形成肿瘤 且干细胞相关基因 细胞中表达增加由此确立了 是乳腺癌干细胞表面标志物的基础理论。 与结肠癌干细胞 细胞皮下注射到免疫缺陷小鼠能形成具有原发瘤形态特征和免疫表型的恶性肿瘤将其种植数代后肿瘤生长更迅速并仍能保持原来的表型 。细胞并不能形成种植瘤。同样结肠癌细胞在无血清培养基中体外培养一年以上办能彤成同型肿瘤。证实这种结直肠癌 细胞是一种特定类型的结肠癌致瘤细胞。 与肝癌干细胞 文献综述 】利用单克隆抗体识别抗原的原理 从人类肝细胞癌细胞系 细胞株中检测到的 细胞占 利用抗 抗体分选细胞继续培养 天后 ‘细胞显示出更强的增殖能力同时 细胞中编码 蛋白的 水平显著增加。利用流式细胞术和荧光激活细胞分选结果显示 体外培养天后 细胞包含细胞和 。细胞 这个比例与 的组成成分相一致。将分离的 细胞分别皮下注入不同的小鼠 细胞注射组能够产生相同 表达率肿瘤 肝癌细胞系中的表达通过体外培养、腹腔注射体内培养 用磁珠分离细胞 利用免疫荧光染色对这种细胞亚群进行检测 证实 细胞的存在及其肿瘤干细胞的特性 即能够在体外体内的增殖和致瘤能力。 与胰腺癌干细胞 等‘例用实时 检测在五种胰腺癌细胞系的表达量 胰腺癌中高表达 而在 细胞中 只有少量的升高。有 的胰腺癌细胞系表达 由此认为 可能是一种鉴定胰腺癌干细胞的表面抗原。 与喉癌干细胞 细胞系分离纯化肿瘤细胞 细胞占 细胞在无血清培养基中培养后的吸光度分别均高于相同条件下未分选细胞和 。细胞 细胞在培养细胞中的比例逐日下降。由此推知 肿瘤细胞有比其他细胞亚群强的体外分化和增殖能力 是喉癌起始细胞的标志之一。 】在非小细胞肺癌内皮祖细胞发现分子表达 肿瘤中的内皮祖细胞可能来源于肺癌的肿瘤干细胞。张惠中等【 实验结果表明 抗原在人 和正常肺组织中普遍表达 并推测 可能是肺癌干细胞新的标记物 但缺乏直接证据。 】报道在小细胞肺癌和非小细胞肺癌中存在 细胞注射 细胞在裸鼠皮下很快形成移植瘤 体外传代和扩增实验证实 细胞在含上皮生长因子的无血清培养基中形成瘤球 具有多向分化和自我更新能力 认为 可作为肺癌干细胞标记物。 与食管鳞癌干细胞郑乃刚等【 用免疫酶或免疫荧光技术检测食管鳞癌组织和细胞 的表达情况发现了一小群 强阳性小细胞强阳性小细胞位于鳞癌上皮基底层 阳性细胞的特殊定位直观地揭示出 性细胞是具有克隆形成潜能的得出 强阳性小细胞和 强阳性细胞可能是肿瘤干细胞的标志的结论。 展望多项实验研究发现 基因及其表达水平在恶性肿瘤的预测、早期诊断、病情进展、转移潜能与预后的估计等方面具有很大价值这与这二者与肿瘤干细胞的密切关系有关。随着研究进一步进展 对肿瘤的生物学作用从而发挥其高效的抗肿瘤作用。实验材料和方法第二章实验材料和方法 实验材料 细胞株选用人低分化胃腺癌 细胞株购自上海中国科学院生物化学与细胞生物学研究所。 胎牛血清的培养液 培养液中含两种抗生素 青霉素 和链霉素 置于 、体积分数 培养箱培养。细胞呈贴壁生长当细胞生长活力良好 对数生长期时使用。 主要试剂 薏苡仁酯注射液 浙江康莱特药业有限公司 培养基 美国 公司 美国 公司 胎牛血清 杭州四季青公司 胰蛋白酶 美国 公司 美国 公司 美国 公司 氯仿 南京化学试剂一厂 异丙醇 南京化学试剂一厂 无水乙醇 南京化学试剂一厂 美国 公司 裂解液 美国 公司 逆转录试剂盒 美国 公司 溴化乙锭 公司琼脂糖 中科院上海药物研究所 大连宝生物工程有限公司 美国公司 公司结晶紫 国药集团化学试剂有限公司 抗体美国 公司 东南人学硕士学位论文 抗体美国 公司 抗体武汉博士德生物公司 发光剂 美国 公司 上海生物工程公司上海生物工程公司 蛋白分子质量标准 上海生物工程公司 丙烯酰胺 上海生物工程公司 上海生物工程公司 美国公司 浓硝酸 上海化学试剂一厂 主要仪器设备 培养瓶 江阴光明玻璃仪器厂产品 德国公司 净化工作台 苏净集团安泰公司台式离心机 上海安亭科学仪器厂血球计数板 上海医乐医用仪器厂普通光学显微镜 日本公司 一次性微孔滤膜 美国 公司 普通冰箱 青岛海尔 低温冰箱日本三洋公司 磁力加热搅拌器 常州国华 蒸汽灭菌器 衡阳医疗器械公司 电子天平 德国 公司 电热恒温水槽 上海精宏实验设备有限公司孔培养板 德国 公司 酶联免疫检测仪 美国伯乐公司恒温振荡器 太仓市科教器材厂微量加样器 德国 美国公司 全能台式高速冷冻离心机 公司核酸定量仪 瑞典 公司 实验材料和方法 扩增仪 德国 公司 生物分光光度计 德国 公司 凝胶成像仪 北京天能公司 紫外分析仪 美国柯达 垂直电泳仪美国 公司 水平电泳槽 北京六一科学仪器厂 凝胶成像分析系统 美国伯乐公司 稳压稳流转移电泳议 南京科宝仪器研究所 脱色摇床 北京仪器科技公司硝酸纤维素膜 美国 公司 实验方法及步骤 主要试剂配制 胎牛血清 室温融化 使用前进行灭活处理 以消除补体活性 小量分装 保存备用。 培养液 取干粉型 培养基一袋倒入 烧杯中 用少许双蒸水洗包装袋三次 至上述烧杯中加入双蒸水约 再加入青霉素 、链霉素 在磁力搅拌器上搅拌 充分溶解后 。采用混合纤维素微孔滤膜正压过滤除菌 分装于无菌玻璃瓶中 每瓶 保存备用。使用时每瓶加入胎牛血清使其终浓度为 。培养液配好后 要先抽取少许放入青霉素小瓶内 温箱内置以检测培养液是否有污染。 缓冲液 准确称量 依次逐个溶解于双蒸水中溶解时必须待一种试剂完全溶解之后 再加入下一种试剂 直至所有试剂溶解后混匀 分装于玻璃瓶中高压蒸汽消毒灭菌 冰箱内保存备用。 胰蛋白酶 称取胰蛋白酶 溶解于 高压消毒的 缓冲液 磁力搅拌混匀 使其完全溶解 左右小量分装 保存备用。 溶液的配制 放入小烧杯中加入 缓冲液 磁力搅拌混匀 使其完全溶解 混合纤维素微孔滤膜正压过滤除菌小量分装 不雨大学硕上学位论文避光保存备用。 加入双蒸水 室温密封保存。缓冲液 室温保存用时 倍稀释。 过夜高压 琼脂糖溶于溶液中 加热完全溶解 待冷却至 左右加入溴化乙锭溶液 摇匀 倒入插好样品梳的水平电泳槽制胶板中 胶凝固 后拔出梳子 将胶板置于电泳槽中 加入 溶液 备用。显色液 在小试管中先加 蒸馏水 再按 缓冲液、底物、显色剂的顺序加入试剂各 混匀即配成 显色液 加入异丙醇溶解后 分装于 离心管中 保存。 加入 蒸馏水 水浴下溶解室温保存。若长期保存出现沉淀 水浴溶化后 仍可使用。 单去污剂裂解液 保存。使用时加入 至终浓度为 考马斯亮蓝溶液将考马斯亮蓝 乙醇溶解 再加入磷酸 用蒸馏水定容至 保存。牛血清白蛋白 进行倍稀释成 保存。 还原型 上样缓冲液 二硫苏糖醇 溴酚蓝 甘油 二硫苏糖醇 溴酚蓝 甘油 分装于离心管中 保存。实验材料和方法 分离胶和 浓缩胶 分离胶 两块胶 浓缩胶 两块胶 超纯水 立即混匀即可灌胶。电泳液缓冲液 甘氨酸 甘氨酸 蒸馏水定容至 。溶解后室温保存 溶液可重复使用 转移缓冲液甘氨酸 甲醇 甘氨酸 甲醇 蒸馏水定容至 。溶解后室温保存 次溶液可重复使用 三氯乙酸磺基水杨酸 用蒸馏水定容至 使用时再稀释 缓冲液混匀后即可使用 现用现配。 封闭液 脱脂奶粉的缓冲液 国产光明牌脱脂奶粉 溶解后保存。使用时 恢复室温 用量以盖过膜面即可 一次性使用。 洗脱抗体缓冲液 一巯基乙醇 巯基乙醇 加蒸馏水定容至 。配制时 在通风厨内进行。 保存。可重复使用 显影液自来水 逐次加入米吐尔 无水亚硫酸钠 无水碳酸钠 溴化钾 。配制时上述药品应逐一加入 待一种试剂溶解后 再加入后一种试剂。 保存。使用时用自来水稀释至 定影液自来水 逐次加入硫代硫酸钠 、亚硫酸钠 、冰乙酸 东南犬学硕卜学位论文 、硼酸 、钾明矾 加水定容至 室温保存。 结晶紫溶液将 结晶紫溶于 细胞培养细胞的复苏调好 水浴后 冰箱取出冻存的胃癌细胞快速放于 水浴中使之于 内完全融化。融化好的冻存细胞液拿到己消毒的超净台内 无菌吸管把细胞转移到离心管中 加入 倍体积培养液 离心 弃去上清液 再加培养液重复离心 弃去上清液 加含有 胎牛血清的 完全培养液 含青霉素 链霉素 吹打细胞使之悬浮 并接种到培养瓶中 倒置显微镜观察可见悬浮的细胞 饱和湿度条件下培养。次同更换培养液继续培养。如果复苏细胞密度较高要及时传代 一般两天传一代。 细胞的换液倒置显微镜下观察细胞多数已贴壁生长 少许悬浮 培养液颜色出现变黄、变淡。弃去培养瓶内的培养液 冲洗细胞两至三遍弃去冲洗液 用无菌吸管吸取含 胎牛血清的 完全培养液入培养瓶中 覆盖瓶底细胞表面 将培养瓶瓶盖稍旋松 饱和湿度条件下培养。细胞的传代将已长满瓶壁或长满瓶壁 以上的细胞 先弃去培养液 冲洗两遍以洗去胎牛血清然后将 胰蛋白酶吸入培养瓶中约 培养瓶 稍加摇动让胰蛋白酶流过培养瓶底部表面 轻拍瓶壁 倒置显微镜下观察发现细胞伪足回缩 细胞变圆即加入 倍于胰蛋白酶液体积的含有 胎牛血清的培养液终止消化。吸管吹打使细胞 注意不要用力造成过多气泡 成单细胞悬液 一瓶接种二到三瓶 胎牛血清的完全培养液 放入细胞培养箱继续培养。 细胞的冻存取对数生长期细胞用胰蛋白酶消化离心 去除胰蛋白酶和培养液 加入配制好的冻存培养液 胎牛血清的完全培养液 使细胞悬浮 细胞密度约为 分装入灭菌的冻存管中 冰箱中。法检测细胞增殖抑制效应 实验原理

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